在微生物檢測、食品安全、環(huán)境監(jiān)測與生命科學(xué)研究中，往往需要區(qū)分＂死菌＂與＂活菌＂，傳統(tǒng)的核酸檢測方法無法區(qū)分樣本中死菌殘留 DNA，影響實驗結(jié)論與檢測準確性。PMA（疊氮溴化丙錠，Propidium Monoazide）（Biorigin，BN14036)是一種高親和性的DNA結(jié)合染料，可選擇性地修飾膜受損的死細胞的 DNA，阻礙死細胞中目標DNA的PCR擴增，被廣泛應(yīng)用于多種微生物樣本的活菌檢測。
PMA 是一種高親和性的 DNA 結(jié)合染料，該染料本身具有微弱的熒光，但與核酸結(jié)合后可以發(fā)出更為明亮的熒光。它尤其與雙鏈 DNA 具有高親和性。
PMA 不具有細胞膜滲透性，因此可選擇性地修飾膜受損的死細胞的 DNA。PMA 修飾的 DNA 經(jīng)藍光（~464 nm）光解后，PMA 上的光反應(yīng)性疊氮基轉(zhuǎn)化為高反應(yīng)性氮烯自由基，與 DNA 結(jié)合位點附近的任何烴部分反 應(yīng)形成穩(wěn)定的共價氮碳鍵，從而導(dǎo)致永久性 DNA 修飾（圖 1）。
該修飾過程會使 DNA 不溶，并使其在隨后的基因組 DNA 提取過程中與細胞碎片一起丟失，進而阻礙死細胞中目標 DNA 的 PCR 擴增。殘留在溶液中未結(jié)合的 PMA，在強光照射下 與水分子反應(yīng)分解成無交聯(lián)活性的羥胺化合物，使羥胺不再能夠共價結(jié)合 DNA，從而不影響 PCR 擴增。
這個特性使得 PMA 可以通過實時定量 PCR（qPCR）的手段，檢測多種樣本類型包括：細菌、生物膜、酵母、真菌、病毒和真核細胞；與 qPCR、 NGS、Sanger 測序和 LAMP 技術(shù)相結(jié)合，廣泛應(yīng)用在食品和水安全和環(huán)境測試中。
使用前注意事項
1. PMA根據(jù)細胞膜通透性區(qū)分死菌和活菌。許多殺死細菌的方法會導(dǎo)致細胞膜受損，因此適用于PMA檢測。 但有些方法， 如紫外線照射，可能不會立即導(dǎo)致細胞膜破裂。 因此，在選擇PMA檢測之前，需先進行文獻檢索和預(yù)實驗確定是否適用于 您選擇的細菌類型和殺傷方法。
2. PMA處理完細菌后需要進行光解，以使染料與死細胞 DNA 共價結(jié)合。 注：光解操作可以使用藍色或白色光源。一般來說，燈越亮，光解步驟的效率就越高。非 LED 燈（如鹵素?zé)簦┛赡軙訜?您的樣本并對分析產(chǎn)生負面影響，照射時需要使用冰塊對樣品降溫處理。
3. 樣本可以在光解后冷凍保存。若在進行PMA處理光解之前冷凍樣本可能會損壞細胞膜并產(chǎn)生假陰性結(jié)果。如需在檢測之 前冷凍樣本，建議先進行預(yù)實驗。
4. PMA 的部分作用機制是通過沉淀從樣本中去除 PMA 共價修飾的DNA；因此，在提取基因組DNA時，需使用相同體積 的基因組DNA洗脫液，進行體積歸一化處理。陽性對照可以使用活細胞的基因組DNA。
5. 為了驗證PMA在測試樣本中的有效性，可對比同處理樣本-/+PMA之間的Ct (dCt)變化。
相關(guān)產(chǎn)品
PMA（疊氮溴化丙錠）
品牌：百瑞極Biorigin
產(chǎn)品貨號：BN14036
產(chǎn)品規(guī)格：1 mg；5× 1 mg
應(yīng)用范圍：核酸染色
產(chǎn)品參數(shù)
外觀：可溶于DMSO、DMF或水的深紅色固體
Ex (pH 3) = 464 nm (before photolysis)
Ex/Em (after photocrosslinking to nucleic acid) = 510/610 nm
分子式：C27H32Cl2N6
分子量：511.5
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